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Fundamentos del Método

La Turbidimetria y la Nefelometría, se basan en el hecho de que la formación de inmunocomplejos solubles, con un tamaño de 1000+ Å va acompañada por un aumento proporcional de la luz difractada y en consecuencia una disminución de la luz transmitida I (Ecuación de Rayleigh). En ambos casos, la curva dosis-respuesta es similar a la curva de inmunoprecipitacion de Heidelberg-Kendall}

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Inmunoturbidimetria o Turbidimetria: mide la disminución de la intensidad de la luz transmitida I a 180º debida a la difracción producida por los complejos inmunes formados. La disminución de la intensidad de luz (aumento de Absorbancia) es proporcional a la concentración de analito presente.

Nefelometria cuantifica la luz difractada hacia un detector en determinados ángulos (normalmente 90º). La misma aumenta proporcionalmente al número y tamaño de los inmunocomplejos formados.

Resulta evidente que la naturaleza de la reacción inmunoquímica es la misma y lo que los diferencia es el principio de detección empleado.

Rango de medida

La inmunoturbidimetria permite cuantificar proteínas plasmáticas, mediante la lectura espectrofotométrica de la Absorbancia producida en la reacción Ag-Acpo. bajo condiciones controladas. Para ello es necesario conocer el Rango de Medida.

El mismo, se define para cada equipo y cada determinación dejando una zona de seguridad para evitar posibles errores debidos a exceso de Antígeno. Fig. 3.

fig3

 

Una vez conocido el Rango de Medida, es posible definir los valores de Estándares para trazar la curva de calibración. Fig. 4

 

 

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Fig. 4

El Estándar 1 define el límite de detección del ensayo y corresponde a una Absorbancia 3 veces superior al Blanco de reacción.

El Estándar 6 es punto más alto de trabajo, por encima del cual es necesario efectuar diluciones de la muestra.

La interpolación de las absorbancias de las muestras permite obtener la concentración del analito a medir.

Para cada nuevo lote de reactivos, es necesario trazar una curva de calibración. En corridas sucesivas es recomendable incluir controles.

 

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